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ht和hat培養基原理?聽聽專家怎么說

作者:樂診生物技術發布時間:2021-06-11 10:41瀏覽量:

HAT 的選擇原理

  在HAT培養液中,未融合的效應B 細胞核兩個效應B細胞融合的D途徑被氨基蝶呤阻斷,隨S途徑正常,但因缺乏在體外培養液中增殖的能力,一般10天左右會死亡。對于骨髓瘤細胞以及自身融合細胞而言,由于通常采用的骨髓瘤細胞是次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶缺陷型細胞。

  因此自身沒有S途徑,且D途徑又被氨基蝶呤阻斷,所有在HAT培養液中也不能增殖而很快死亡。只有骨髓瘤細胞與效應B細胞相互融合形成的雜交瘤細胞,既具有效應B細胞的S途徑,又具有骨髓瘤細胞在體外培養液中長期增殖的特性,因此能在HAT培養液中選擇性存活下來,并不斷增殖。

為什么用HAT換成HT培養基?

  換成HT:剛融合篩選出來的細胞還是很脆弱,所以要H,T作為原料——使雜交瘤細胞能夠生長起來~~~也可以用HAT,不過此時A已不重要,沒有必要繼續添加

hat培養基中字母h,a,t分別代表什么和什么作用?

  HAT(H—Hypoxanthine次黃嘌呤,A—Aminopterin甲氨喋呤,T——Thymidine胸腺嘧啶核苷)培養基的選擇培養。

  由于氨基蝶呤可阻礙起始合成途徑,所以培養基中含有它時,細胞便只有中間合成途徑,所以必須供給核苷酸。至于缺失中間合成途徑的細胞,可失去增殖能力臻于死亡。根據這一點,不僅把混存于細胞群中的正常細胞,通過試管內培養進行選擇,例如嘌呤的中間合成途徑缺失株和嘧啶的中間合成途徑缺失株,由于可以互補,所以兩者的雜種細胞,即使在氨基蝶呤的存在條件下也可以增殖。在這種情況下,利用HAT培養基可對雜種細胞進行選擇。次黃嘌呤和胸腺嘧啶脫氧核苷可作為中間合成途徑的原料而進行添加。

HT培養基是什么培養基?

  用于篩選具有次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶(HPRT)或胸苷激酶(TK)活性缺陷細胞的培養基.是含有次黃嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸苷(T)和甘氨酸的完全培養基.在氨基蝶呤(二氫葉酸類似物)存在下,這種酶缺陷的細胞不能通過核苷酸合成旁路合成次黃嘌呤和胸苷.HPRT和TK缺陷細胞可以在此培養基中生存.是常用的骨髓雜交瘤細胞選擇性培養基.

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